GIRLS DEFENCE использует стилистику аниме. Мир этой игры населяют только женщины. Все мужчины погибли из-за радиации после масштабной войны. Однажды выяснилось, что мертвые парни превратились в зомби и пошли в наступление. Девушки начали обороняться от ходячих мертвецов. Героиня по имени О после упорных тренировок присоединилась к армии и стала лучшим солдатом.

GIRLS DEFENCE смешивает вместе 2 жанра: action и Tower Defense. Женщина-протагонист может передвигаться по локации влево или вправо и самостоятельно отстреливать нежить. В местах, где необходимо защищать точки, она расставляет своих коллег в 3 ряда. Бойцы этом в инди-проекте выполняют роль башен. Они отстреливают летающие мозги, слизней, похожих на медуз существ и классических мертвяков.

Среди воительниц доступны: стрелок, огнеметчик, снайпер, гренадер, пулеметчик, защитник. Также есть дама с ракетницей и барышня, метающая гранаты, способные отскакивать от поверхностей. У каждого бойца собственный запас здоровья. Если главный персонаж погибает, то наступает конец игры. Аналогичное последствие влечет за собой допущение проникновения группы зомби в город. Основную девушку можно прокачивать за деньги. Помимо этого валюта тратится на покупку новых юнитов. Она зарабатывается путем выполнения сюжетных и побочных заданий. Награда зависит от выбранного уровня сложности.